PCR로 안지오텐신전환효소 유전자 분석하기(ACE PCR)

안지오텐신전환효소를 생성하는 ACE 유전자는 그 type에 따라 II, ID, DD의 세 가지로 나뉩니다. 간략히 얘기하면 안지오텐신전환효소는 안지오텐신Ⅰ을 절단하여 강한 혈압 상승 작용을 나타내는 안지오텐신Ⅱ를 활성화시킵니다.

중합효소연쇄반응(PCR)은 특정 서열의 유전자를 증폭하는 실험 방법입니다.

 

영상으로 보고 싶다면 아래 유튜브로 접속해주세요.
https://youtu.be/na1gE55dwng

 

실험과정

 

세포에서 DNA부터 추출하겠습니다.

 

마이크로튜브 뚜껑에 네임펜으로 개인 표시를 해주세요.

 

 

마이크로튜브에 증류수 용액 500㎕를 넣어주세요.

 

멸균 브러쉬를 돌려가며 양쪽 볼 안쪽을 20회 이상 긁어주세요.

 

증류수가 들어있는 마이크로튜브에 브러쉬를 넣고 세포를 풀어주세요.

 

마이크로 튜브(A)를 피펫팅해주세요.

 

25㎕만큼 PCR 튜브(B)로 옮기고, 옮긴 튜브에 표시를 해주세요.

 

PCR 튜브(B)에 proteinase K 5㎕와 SLB 50㎕를 넣어주세요.

 

 

미니 원심분리기를 30초 돌려 스핀 다운 시켜주세요.

 

PCR기기나 히팅블록에 PCR 튜브(B)를 넣고 95℃, 10분간 넣어주세요.

 

새로운 PCR 튜브(C)에 개인 표시를 해주세요.

PCR mastermix 12.5㎕,  primer F(forward, sense) 1㎕, primer R(reverse, antisense) 1㎕,  멸균증류수(DW) 8㎕를 
PCR 튜브(C)에 넣어주세요. 순서 상관없어요.

 

1. PCR mastermix 12.5㎕를 PCR튜브(C)에 넣어주세요.

2. primer F,primer R을 각각 1㎕씩 PCR튜브(C)에 넣어주세요.

소량일수록 튜브 벽면에 주입하고, 눈으로 반드시 확인해주세요.

 

3. 멸균증류수(DW) 8㎕를 PCR 튜브(C)에 넣어주세요.

 

 

 

다 넣었으면 PCR튜브(B)에서 2.5㎕를 취해 PCR튜브(C)에 넣어주세요.

 

미니 원심분리기를 30초 돌려 스핀 다운 시켜주세요.

 

PCR 기기 챔버에 넣고 PCR을 진행해주세요.

 

 

다음과 같이 진행하였습니다.

1단계 95℃ 2분
2단계 95℃ 30초
55℃ 30초
72℃ 30초
3단계 72℃ 5분
8℃ Hold

 

 

이제 PCR결과를 보기위해 전기영동해주세요.
1.5% 아가로즈겔을 사용하며,
겔 제작할 때 DNA 염색 시료를 첨가해서 만들어주세요.

 

첫 번째 well에 DNA ladder 8마이크로리터, 다른 well에 증폭시킨 DNA를 8마이크로리터를 로딩해주세요.

 

 

결과 분석하겠습니다.
안지오텐신전환효소를 생성하는 ACE 유전자는 그 type에 따라 II, ID, DD의 세 가지로 나뉩니다.

 

ACE 유전자형 사람 A, F는 ID형 사람 B, C는 DD형, 사람 E는 II형, D는 너무 연하게 밴드가 나와 보기 어려워요.

 

 

DNA지문으로 활용되는 다른 서열 PCR결과예요.

사람마다 모두 밴드 형태가 다른 것을 알 수 있어요.

 

이렇게 해서 안지오텐신 전환효소 유전자와 가변연쇄반복서열을 PCR과 전기영동을 통해 분석해보았습니다.

사람 사이에 가진 유전전 다형성을 보이는 많은 부분들을 PCR과 전기영동을 통해 분석해 볼 수 있습니다.

프라이머 서열과 PCR 세부 과정은 선행연구 논문을 참고해서 찾아보세요.